淘客熙熙

主题:从蚂蟥来源的血栓类药物 -- 立秋

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家园 探讨一下

他们的分子和我们的区别仅仅在头三个氨基酸序列。他们做了一个貌似小小的改变,然后设置了专利保护。就是这三个氨基酸让他们的产品能均一地表现为单分子。好处是,这可以轻易通过FDA对产品均一性的普通要求。潜在的好处是因为是单分子,当然免疫原性要比双分子要好,更适合做药。

我刚刚看了Hirudin和凝血酶复合体的结构,N-端的3个氨基酸看样子正好是结合在凝血酶的活性位点上的。凝血酶是一种蛋白酶,正常情况下它的底物是一个肽段,在活性位点被切掉,而hirudin的N-端3个氨基酸把这个位置给堵上了。我觉得改变这3个氨基酸似乎不应该影响多聚体的形成。首先,3个氨基酸是很短的,不大可能为二聚化提供足够的亲和力;其次,在一个蛋白末端,又没有结构约束的一小段肽是不大可能有稳定的结构的。如果这3个氨基酸参与了二聚体的形成,NMR应该能检测到三个氨基酸都受到结构约束(NMR constrains)。而1989年hirudin的NMR结构已经表明至少hirudin的头两个氨基酸在溶液里是没有稳定的结构的(外链出处)。

我查了一下,从蚂蝗来的hirudin,是一些序列上略有不同的变体的混合物(外链出处),最主要的区别是,它们在N-端的3个氨基酸有些不同。前面说了,这3个氨基酸也正是结合凝血酶的关键部分。最早发现的是序列是VVY,然后又发现了有ITY,VSY这样的不同序列,而它们都是自然状态下的蚂蝗产生的。我不知道那个专利用的是什么,不过我感觉似乎N-端3个氨基酸并不关系dimer的问题,而是有关这些isoform与凝血酶的亲和力。

另外我有些好奇,你们是用什么办法把重组表达的hirudin的N-端切到这3个氨基酸的?从hirudin和凝血酶的复合体结构看,好像N-端如果多一两个氨基酸,就不成了,而常用的酶似乎经常都带点尾巴,您们用factor Xa或者EK?

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