主题：从蚂蟥来源的血栓类药物 -- 立秋
那是1999年，除了策划攻台路线以外也有过作凝血酶原+血纤维蛋白原+blablabla的止血胶带的打算，为解放台湾出力，:)...这样出血（内出血就不行了）的话可以强力止血...
不过骨头断了，最好还是固定好，慢慢待它自己长好。骨头跟珊瑚一样，溶合两头的成骨细胞加上钙化，需要时间。MIT的张曙光教授那里发明的细胞培养涂层（名字不确切）可以诱导细胞沿一个特定表面生长，换成成骨细胞+神经细胞，是可以做组织培养的-换根骨头也是考虑的（前提是，干细胞转化技术要过关，不然拿别人的细胞去弄，容易排异反应，这个你查查俞君英的进展就知道还差多远了-不太远了。）技术都需要整合，靠一个技术一种产品不能万能。
北京有个徐荣祥，这位号称啥都能做，不过搞笑是其最大特长。
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回到那三个氨基酸，没有结构信息确实很难知道哪部分是结合区域；暴力破解的工作没有来得及做---因为没有考虑过这个问题。还是那句话，正确的提出问题是成功的一小半...
新年快乐！
可以靠身体吸收，可以靠溶栓药物。水蛭唾液里面这部分咱没有涉及到...
我做的是冻结方案优化条件摸索大规模生产条件那部分。
让大家都忍一天不喝水，尿液就自动浓缩了不是?
节省很多离心时间...:)
我们实验室里可是有不少穆斯林呢
99年您就在做了，得叫声前辈了
正确的提出问题是成功的一小半...
第一次听说，经典啊，记下了
另：想听听徐荣祥的故事
这个东东可以用来和纱布一起，让你闻不着什么味道...接尿浓缩什么的能用上。
徐荣祥这个故事，就是一个笑话，不提他还好，浪费时间就不好了。所以少说几句可以，多了就不好了。
开始不知道这个大仙，一个朋友告诉我的，说国内有重大医学进展，徐荣祥造出了万能细胞（后来一查，他使用了蜂蜡，还有一些类似草木灰之类的东东来治疗烧伤，原理就是把创伤附近的细胞给改造成了万能细胞）。当时一听，忙说,冷静！一听就是假的阿...但是不排除有类似的原理。每年这朋友都念念不忘徐，呵呵...徐大仙的实验室因为总得不到国家的重视，把一人防工程改造了一下凑合着弄了一个民间实验室，特点就是安全，地下五米呢。
2002年08月20日 08:09 北京娱乐信报：“五年肯定克隆所有人体器官”
昨天，徐荣祥教授再次向记者描述了五年后再生医学所创造出的奇迹：“五年后，当我们的成果完全成功了，这世界上就没有什么疾病可以困扰人类了。除了人体机能的新陈代谢、正常衰老，其他的一切都能控制。”
尽管记者一再表现出诧异，表示不能理解，但徐教授还是很坚定地强调道：“五年内，我肯定能克隆出所有人体器官。”(张晓娟) 编后语：从DNA、纳米到克隆，一个个科学术语忽然间成为大众词汇；从“哥德巴赫猜想”、霍金到克隆科学家，一波波“科学热”至今余温犹在。事实上，在这些尖端科技进入公众视野时，它们被赋予了更简单更明了的含义。有时候，这种简单明了却会造成某种偏离和误解。
徐荣祥教授是否能在五年内克隆人体全部器官，只是一场单纯的学术讨论。科学本身是严谨而严肃的，拒绝任何哗众取宠的炒作。人们既要对科学充满探索的渴望与勇往直前的精神，也要尊重科学自身的规律，不能存任何一蹴而就的幻想。我们只希望：在不断的严肃的科学探讨过程中，我们的科学与科普工作能够更上一层楼。
我刚刚看了Hirudin和凝血酶复合体的结构，N－端的3个氨基酸看样子正好是结合在凝血酶的活性位点上的。凝血酶是一种蛋白酶，正常情况下它的底物是一个肽段，在活性位点被切掉，而hirudin的N－端3个氨基酸把这个位置给堵上了。我觉得改变这3个氨基酸似乎不应该影响多聚体的形成。首先，3个氨基酸是很短的，不大可能为二聚化提供足够的亲和力；其次，在一个蛋白末端，又没有结构约束的一小段肽是不大可能有稳定的结构的。如果这3个氨基酸参与了二聚体的形成，NMR应该能检测到三个氨基酸都受到结构约束（NMR constrains）。而1989年hirudin的NMR结构已经表明至少hirudin的头两个氨基酸在溶液里是没有稳定的结构的（外链出处）。
我查了一下，从蚂蝗来的hirudin，是一些序列上略有不同的变体的混合物（外链出处），最主要的区别是，它们在N－端的3个氨基酸有些不同。前面说了，这3个氨基酸也正是结合凝血酶的关键部分。最早发现的是序列是VVY，然后又发现了有ITY，VSY这样的不同序列，而它们都是自然状态下的蚂蝗产生的。我不知道那个专利用的是什么，不过我感觉似乎N－端3个氨基酸并不关系dimer的问题，而是有关这些isoform与凝血酶的亲和力。
另外我有些好奇，你们是用什么办法把重组表达的hirudin的N－端切到这3个氨基酸的？从hirudin和凝血酶的复合体结构看，好像N－端如果多一两个氨基酸，就不成了，而常用的酶似乎经常都带点尾巴,您们用factor Xa或者EK？
不过基本感觉都靠不住。Dimer是在要求的SDS-PAGE这一步没有绕开的。大量的还原剂没有能打开dimer;后来发现其实还是有希望的，需要的处理时间比普通蛋白要长的多得多。
前三个氨基酸未必就是Dimer的界面，也不是关键的凝血酶结合位点而算是一部分，N端是个球形，这个球才是关键的.水蛭素的变异体确实存在三个，但是专利的那个并非自然Isoform，也不是这些isoform的组合。我们做到的isoform超过自然存在的hirudin与Thrombin的亲和力。
看来现在的xx tag毒害匪浅啊，都带上Tag，其实成本就高了。俺们的做法是不要Tag的。
站到水田里牺牲自己喂蚂蟥也是一项苦差事。似乎古时候老外的医疗对放血很重视。
http://www.channel4.com/history/microsites/W/worstjobs/medieval.html
还有个问题，我印象里好像酵母天生是产很多消化性的蛋白酶的，所以不用tag的话，纯化似乎比较难。您们感觉这是个问题吗？
Initiation codon一定非要AUG么？
我可没有说是用的酵母系统，其实酵母很不错的。
二狗同志的表达看来作的不是很多，其实不用作很多种，够用就行了。
我一直以为只有aug才是start codon。刚刚查了wikipedia才发现原来还有rare start codon。比如GUG……呵呵，我明白了。
顺便说一下，我觉得他们用酵母这一点，恐怕是个关键。真核生物的secretion pathway(主要是ER)是个氧化环境，里面有很重要的二硫键异化酶系统（calnexin/calreticulin），可以充分保证分泌蛋白的折叠和结构均一性，这个是原核系统无论如何都比不上的。
呵呵，你明白了啥啊，:)
我当初不是用改变密码子的方法来做的，办法很多...
留个悬念，不然说了印象不深。
先歇了，我这儿+1区。你再查查...?